實(shí)驗人員如何安全地使用生物安全柜？

    生物安全柜前的空氣幕很脆弱，易受到干擾而造成污染。實(shí)驗中不能隨意開(kāi)啟前窗的位置，操作動(dòng)作緩和，手臂避免頻繁出入安全柜，以防止打擾氣流。在安全柜工作時(shí)，開(kāi)關(guān)房門(mén)、人員在房間內走動(dòng)、甚至在操作人員背后咳嗽等都會(huì )形成湍流而增加微生物氣溶膠溢出量，而造成實(shí)驗室污染。

1. 位置

空氣通過(guò)前面開(kāi)口進(jìn)入生物安全柜的速度大約為0.45m/s。這樣速度的定向氣 流是易受到干擾的，包括人員走近生物安全柜所形成的氣流，打開(kāi)窗戶(hù)，送 風(fēng)系統調整以及開(kāi)關(guān)門(mén)等都可能造成影響。

因此，為理想的是，生物安全柜應位于人員活動(dòng)，物品流動(dòng)以及可能會(huì )擾亂 氣流的地方。在安全柜的后方以及每一個(gè)側面要盡可能留有30cm的空間，以利 用對安全柜的維護。在安全柜的上面應留有30-35cm的空間，以便測量空 氣通過(guò)排風(fēng)過(guò)濾器的速度，并便于排風(fēng)過(guò)濾器的更換。

2. 操作人員 

生物安全柜如果使用不當，其防護作用就可能大大地受到影響。操作人員在移動(dòng)雙臂進(jìn)出安全柜時(shí)，需要小心維持前面開(kāi)口處氣流的完整性，雙臂應該垂直地緩慢進(jìn)出前面的開(kāi)口。

手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約一分鐘，以便安全柜調整完畢并且讓里面的空氣“掃過(guò)”手和雙臂的表面以后，才可以開(kāi)始對物品進(jìn)行處理。要在開(kāi)始實(shí)驗之前將所有必須的物品置于安全柜內，以盡可能減少雙臂進(jìn)出前面開(kāi)口的次數。

3.物品放置 

二級生物安全柜前面的進(jìn)氣格柵不能被紙，儀器設備或其他物品阻擋。放入安全柜內的物品應采用70%酒精來(lái)消除表面污染?？梢栽谙緞┙竦拿砩线M(jìn) 行實(shí)驗，以吸收可能濺出的液滴。所有物品應盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺邊緣的位置，并使其在操作中 不會(huì )阻擋候補格柵?？僧a(chǎn)生氣溶膠的設備(例如混勻器，離心機等)應靠近安全 柜的后部放置。像有生物危害性的廢棄物袋，盛放廢棄吸管的盤(pán)子以及吸濾瓶 等體積較大的物品，應該放在安全柜內的某一側。在工作臺面上的實(shí)驗操作應 該按照從清潔區到污染區的方向進(jìn)行。

耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤(pán)不應放在安全柜的外面，否 則在使用這些物品時(shí)雙臂就必須頻繁進(jìn)出安全柜，這樣會(huì )干擾安全柜空氣屏障 的完整性，從而影響對人員和物品的防護。

4.操作和維護

大多數生物安全柜的設計允許全天24小時(shí)工作。人員還發(fā)現，連續工作有助于控制實(shí)驗室中灰塵和顆粒的水平。向房間中排風(fēng)或通過(guò)套管接口與專(zhuān)門(mén)的 排風(fēng)管相連接的A1和A2型生物安全柜，在不使用時(shí)是可以關(guān)閉的。其他如二級B1和二級B2型生物安全柜，是通過(guò)硬管安裝的，就必須始終保持空氣流動(dòng) 以維持房間空氣的平衡。在開(kāi)始工作以前以及完成工作以后，應至少讓安全柜工作5分鐘來(lái)完成“凈 化”的過(guò)程，應即應留在將污染的空氣派出安全柜的時(shí)間。

5.紫外燈 

生物安全柜中不需要紫外燈。如果使用紫外燈的話(huà)，應該每周進(jìn)行清潔，以除去可能影響其殺菌效果的灰塵和污垢。在安全柜重新認證時(shí)，要檢查紫外線(xiàn)的強度，以確保有適當的光發(fā)射量。房間中有人時(shí)一定要關(guān)閉紫外燈，以保護眼 睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害。

6.明火 

在生物安全柜內所形成的幾乎沒(méi)有微生物的環(huán)境中，應避免使用明火。使用明火會(huì )對氣生影響，并且在處理?yè)]發(fā)性物品和易燃物品時(shí)，也易造成危險。 在對接種環(huán)進(jìn)行滅菌時(shí)，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應使用明火。

7. 溢出 

實(shí)驗室中要張貼如何處理溢出物的實(shí)驗室操作規則，每一位使用實(shí)驗室的成員 都要閱讀并理解這些規程。一旦在生物安全柜中發(fā)生由生物學(xué)危害的物品溢 出時(shí)，應在安全柜出于工作狀態(tài)下立即進(jìn)行清理。要使用有效的消毒劑，并在 處理過(guò)程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢出物品的材料都要進(jìn)行消 毒/或高壓滅菌。

8. 安全柜防護效果的評估應該包括對安全柜的完整性，HEPA過(guò) 濾器的泄漏，向下氣流的速度，正面氣流的速度，負壓/換氣次數，氣流的煙 霧模式以及警報和互鎖系統進(jìn)行測試。

還可以選擇進(jìn)行漏電，光照度，紫外線(xiàn)強度，噪聲水平以及震動(dòng)性的測試。在進(jìn)行這些測試時(shí)，檢測人員要經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)的培訓，采用專(zhuān)門(mén)的技術(shù)和儀器設備。

9. 清潔和消毒 

由于剩余的培養基可能會(huì )使微生物生長(cháng)繁殖，因此在實(shí)驗結束時(shí)，包括儀器設 備在內的生物安全柜里的所有物品都應清楚表面污染，并移出安全柜。在每次使用前后，要清除生物安全柜內表面的污染。工作臺面和內壁要用消毒 劑進(jìn)行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里可能發(fā)現的任何微生物。在每 天試驗結束時(shí)，應擦拭生物安全柜的工作臺面，四周以及玻璃的內外側等部位 來(lái)清除表面的污染。在對目標生物體有效時(shí)，可以采用漂白劑溶液或70%酒精 來(lái)消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無(wú)菌水再次進(jìn)行擦拭。將安全柜一直維持運行狀態(tài)。如果要關(guān)閉的話(huà)，則應在關(guān)機前運行5分鐘 以?xún)艋瘍炔康臍怏w。

10. 清除污染 

生物安全柜在移動(dòng)以及更換過(guò)濾器之前，必須清除污染。常用的方法是采用 甲醛蒸汽熏蒸。應該由有資質(zhì)的人員來(lái)清除生物安全柜的污染。

11.個(gè)體防護裝備 

在使用生物安全柜時(shí)應穿著(zhù)個(gè)體防護服。在進(jìn)行和二級生物安全水平的操 作時(shí)，可穿著(zhù)普通試驗服。前面加固處理的反背式試驗隔離衣具有更好的防護 效果，應在進(jìn)行三級和四級生物安全水平(防護服型實(shí)驗室除外)的操作時(shí)使 用。手套應套在隔離衣的外面，可以戴加有松緊帶的套袖來(lái)保護人員的手 腕。有些操作可能還需要戴口罩和安全眼鏡。

12.警報器 

可以在兩種警報器中選擇一種來(lái)裝備生物安全柜。窗式警報器只能裝在帶有滑 動(dòng)窗的安全柜上。發(fā)出警報時(shí)表明操作者將滑動(dòng)窗移到了不當的位置。處理這種警報時(shí)，只要將滑動(dòng)窗移到適宜的位置就可以了。氣流警報器報警時(shí)，表明 安全柜的正常氣流模式受到了干擾，操作者或物品當即處于危險狀態(tài)。當氣流 警報響起時(shí)，應立刻停止工作，并通知實(shí)驗室主管。

13.選擇正確類(lèi)型的生物安全柜，進(jìn)行安裝并正確使用，同時(shí)每年進(jìn)行認證，這是 一個(gè)復雜的程序。強烈在經(jīng)過(guò)良好培訓并具有豐富生物安全操作經(jīng)驗的專(zhuān)家監督下來(lái)進(jìn)行上述工作。該專(zhuān)家應熟悉“參考文獻”部分中所列出的相 關(guān)文獻，并且經(jīng)過(guò)了有關(guān)生物安全柜各方面的培訓。操作者應接受生物安全柜操作和使用的正規培訓。