三級生物安全實(shí)驗室要求規范   上海

按照BSL-3標準建造的實(shí)驗室，也稱(chēng)為生物安全實(shí)驗室。實(shí)驗室需與建筑物中的一般區域隔離。其具體標準微生物操作、特殊操作、安全設備、實(shí)驗室設施要求如下。
3.1標準操作
完成傳染性材料操作后，對手套進(jìn)行消毒沖洗，離開(kāi)實(shí)驗室之前，脫掉手套并洗手。設施內禁止吃、喝、抽煙，不準觸摸隱形眼鏡和使用化妝品。戴隱形眼鏡的人也要佩戴防護鏡或面罩。食物只能存放在工作區以外的地方。禁止用嘴吸取試驗液體，要使用的移液管。一切操作均要小心，以減少和避免產(chǎn)生氣溶膠。實(shí)驗室衛生至少每天清潔一次，工作后隨時(shí)消毒工作臺面，傳染性材料外溢、濺出污染時(shí)要立即消毒處理。所有培養物、儲存物和其它日常廢棄物在處理之前都要用高壓滅菌器進(jìn)行有效地滅菌處理。需要在實(shí)驗室外面處理的材料，要裝入牢固不漏的容器內，加蓋密封后傳出實(shí)驗室。實(shí)驗室的廢棄物在送到處理地點(diǎn)之前應消毒、包裝，避免污染環(huán)境。對BSL-3內操作的菌、毒種必須由兩人保管，保存在安全可靠的設施內，使用前應辦理批準手續，說(shuō)明使用劑量，并詳細登記，兩人同時(shí)到場(chǎng)方能取出。試驗要有詳細使用和銷(xiāo)毀記錄。昆蟲(chóng)和嚙齒類(lèi)動(dòng)物控制應參照其它有關(guān)規定執行。
3.2特殊操作
制定安全細則
實(shí)驗室負責人要根據實(shí)際情況制定本實(shí)驗室特殊而的生物安全規則和具體的操作規程，以補充和細化本規范的操作要求，并報請生物安全委員會(huì )批準。工作人員必須了解細則，認真貫徹執行。
生物危害標志
要在實(shí)驗室入口的門(mén)上標記通用生物危害標志。實(shí)驗室門(mén)口標記實(shí)驗微生物種類(lèi)、實(shí)驗室負責人的名單和，指明進(jìn)入本實(shí)驗室的特殊要求，諸如需要免疫接種、佩戴防護面具或其它個(gè)人防護器具等。實(shí)驗室使用期間，謝*關(guān)人員參觀(guān)。如參觀(guān)必須經(jīng)過(guò)批準并在個(gè)體條件和防護達到要求時(shí)方能進(jìn)入。
生物危害警告
實(shí)驗過(guò)程中實(shí)驗室或物理防護設備里放有傳染性材料或感染動(dòng)物時(shí)，實(shí)驗室的門(mén)必須保持緊閉，無(wú)關(guān)人員一律不得進(jìn)入。門(mén)口要示以危害警告標志，如掛紅牌或文字說(shuō)明實(shí)驗的狀態(tài)，禁止進(jìn)入或靠近。
進(jìn)入實(shí)驗室的條件
實(shí)驗室負責人要、控制或禁止進(jìn)入實(shí)驗室的實(shí)驗人員和輔助人員。未成年人不允許進(jìn)入實(shí)驗室。受感染概率增加或感染后果嚴重的實(shí)驗室工作人員不允許進(jìn)入實(shí)驗室。只有了解實(shí)驗室潛在的生物危害和特殊要求并能遵守有關(guān)規定合乎條件的人才能進(jìn)入實(shí)驗室。與工作無(wú)關(guān)的動(dòng)植物和其它物品不允許帶入實(shí)驗室。
工作人員的培訓
對實(shí)驗室工作人員和輔助人員要進(jìn)行與工作有關(guān)的定期和不定期的生物安全防護培訓。實(shí)驗人員需經(jīng)專(zhuān)門(mén)生物訓練和生物安全訓練，并由有經(jīng)驗的專(zhuān)家指導，或在生物安全委員會(huì )指導監督下工作。必須學(xué)會(huì )氣溶膠暴露危害的評價(jià)和預防方法。在BSL-3實(shí)驗室做傳染性工作之前，實(shí)驗室負責人要保證和證明，所有工作人員熟練掌握了微生物標準操作和特殊操作，熟練掌握本實(shí)驗室設備、設施的特殊操作運轉技術(shù)。包括操作致病因子和細胞培養的技能，或實(shí)驗室負責人特殊培訓的內容，或包括在安全微生物工作方面具有豐富經(jīng)驗的專(zhuān)家和安全委員會(huì )指導下規定的內容。避免氣溶膠暴露：一切傳染性材料的操作不可直接暴露于空氣之中，不能在開(kāi)放的臺面上和開(kāi)放的容器內進(jìn)行，都應在生物安全柜內或其它物理防護設備內進(jìn)行。需要保護人體和樣品的操作可在室內排放式2A型生物安全柜內進(jìn)行。只保護人體不保護樣品的操作可在Ⅰ級生物安全柜內進(jìn)行。如果操作帶有放射性或化學(xué)性有害物時(shí)應在2B2型生物安全柜。禁止使用凈工作臺。
避免利器的感染
對可能污染的利器，包括針頭、注射器、刀片、玻璃片、吸管、毛細吸管和解剖刀等，必須經(jīng)常地采取高度有效的防范措施，必須預防經(jīng)皮膚的實(shí)驗室感染。在BSL-3實(shí)驗室工作，盡量不使用針頭、注射器和其它銳利的器件。只有在必要時(shí)，如實(shí)質(zhì)器官的注射、靜脈切開(kāi)、或從動(dòng)物體內和瓶子（密封膠蓋）里吸取液體時(shí)才能使用,盡量用塑料制品玻璃制品。在注射和抽取傳染性材料時(shí)，使用一次性注射器（針頭與注射器一體的）。使用過(guò)的針頭在消毒之前避免不必要的操作，如不可折彎、折斷、破損，不要用手直接蓋上原來(lái)的針頭帽；要小心地把其放在固定方便且不會(huì )刺破的處理利器的容器里，然后進(jìn)行高壓消毒滅菌。破損的玻璃不能用手直接操作，必須用機械的方法清除，如刷子、夾子和鑷子等。
污染的清除和消毒
傳染性材料操作完成之后，實(shí)驗室設備和工作臺面應用有效的消毒劑進(jìn)行常規消毒，特別是傳染材料溢出、濺出其它污染，更要及時(shí)消毒。濺出的傳染性材料的消毒由適合的人員處理和清除，或由其它經(jīng)過(guò)訓練和有使用高濃度傳染物工作經(jīng)驗的人處理。一切廢棄物處理之前都要高壓滅菌，一切潛在的實(shí)驗室污物（如，手套、工作服等）均需在處理或丟棄之前消毒。需要修理、維護的儀器，在包裝運輸之前要進(jìn)行消毒。
感染性樣品的儲藏運輸
一切感染性樣品如培養物、組織材料和體液樣品等在儲藏、搬動(dòng)、運輸過(guò)程中都要放在不泄漏的容器內,容器外表面要消毒，包裝要有明顯、牢固的標記。
病原體痕跡的監測
采集所有實(shí)驗室工作人員和其他有關(guān)人員的本底血清樣品，進(jìn)行病原體痕跡跟蹤檢測。依據被操作病原體和設施功能情況或實(shí)際中發(fā)生的事件，定期、不定期采集血清樣本，進(jìn)行特異性檢測。
醫療監督與保健
在BSL-3實(shí)驗室工作期間對工作者進(jìn)行醫療監督和保健，對于實(shí)驗室操作的病原體，工作人員要接受相應的試驗或免疫接種（如狂犬病疫苗，TB皮膚試驗）。
暴露事故的處理
當生物安全柜或實(shí)驗室出現持續正壓時(shí)，室內人員應立即停止操作并戴上防護面具，采取措施恢復負壓。如不能及時(shí)恢復和保持負壓，應停止實(shí)驗，及早按規程退出。發(fā)生此類(lèi)事故或具有傳染性暴露潛在危險的其它事故和污染，當事者除了采取緊急措施外，應立即向實(shí)驗室負責人報告，聽(tīng)候指示，同時(shí)報告國家獸醫實(shí)驗室生物安全管理委員會(huì )。負責人和當事人應對其事故進(jìn)行緊急科學(xué)、合理的處理。事后，當事人和負責人應切合實(shí)際的醫學(xué)危害評價(jià)，進(jìn)行醫療監督和預防治療。實(shí)驗室負責人對事件的過(guò)程要予以調查和公布，寫(xiě)出書(shū)面報告呈報國家獸醫實(shí)驗室生物安全管理委員會(huì )同時(shí)抄報實(shí)驗室安全委員會(huì )并保留備份。
3.3安全設備（初級防護屏障）
防護服裝
實(shí)驗室內，工作人員要穿防護性實(shí)驗服，如長(cháng)服裝、短套裝，或有護胸的工作服裝。消毒后清洗，如有明顯的污染應及時(shí)換掉，作為污棄物處理。在實(shí)驗室外面不能穿工作服。
防護手套
在操作傳染性材料、感染動(dòng)物和污染的儀器時(shí)必須戴手套，戴雙層為好，必要時(shí)再戴上不易損壞的防護手套。更換手套前，戴在手上消毒沖洗，一次性手套不得重復使用。
生物安全柜
感染性材料的操作，如感染動(dòng)物的解剖，組織培養、雞胚接種、動(dòng)物體液的收取等，都應在Ⅱ級以上生物安全柜內進(jìn)行。離心、粉碎、攪拌等不能在Ⅱ級生物安全柜內進(jìn)行的工作可在較大或特制的Ⅰ級生物安全柜內進(jìn)行。
其它物理防護
當操作不能在生物安全柜內進(jìn)行時(shí)，個(gè)人防護（Ⅲ級以上類(lèi)似防護設備的具體要求）和其它物理防護設備（離心機安全帽，或密封離心機轉頭）并用。
面部保護
污染區、半污染區應備有防護面具以便緊急使用，當房間內有感染動(dòng)物時(shí)要戴面具保護。建立緊急防護工作點(diǎn)。
緊急防護用品
污染區或半污染區備用防護面具、沖洗眼睛的器具和藥品等，隨時(shí)可用。
3.4實(shí)驗室設施（次級防護屏障）
BSL-3生物安全實(shí)驗室里所原微生物的操作均在Ⅱ級以上（含Ⅱ級）生物安全柜內進(jìn)行，其次級屏障標準如下：
建筑結構和平面布局
建筑物抗震能力七級以上，防鼠、防蟲(chóng)、防盜。實(shí)驗室內凈高應在2.6米以上，管道層凈高宜不低于2.0米。建筑物內實(shí)驗室應與活動(dòng)不受限制的公共區域隔開(kāi)，設置安全門(mén)并安裝門(mén)鎖，禁止無(wú)關(guān)人員進(jìn)入。進(jìn)入設施的通道設帶閉門(mén)器的雙扇門(mén),其后是更衣室，分成一更室（清潔區）和二更室（半污染區），二更室后面為后室或稱(chēng)緩沖室（半污染區），進(jìn)出緩沖室的門(mén)應為自動(dòng)互鎖。如果是多個(gè)實(shí)驗室共用一個(gè)公用的走廊（或緩沖室），則進(jìn)入每個(gè)實(shí)驗室宜經(jīng)過(guò)一個(gè)連鎖的氣閘（鎖）門(mén)。實(shí)驗室應有安全通道和緊急出口，并有明顯標識。半污染區與清潔區之間必須設置傳遞窗。洗刷室、機房等附屬區域應是清潔區，但應盡量縮短與實(shí)驗室的距離，方便工作。實(shí)驗室內可設密閉觀(guān)察窗。
密閉性和內表面
一切設施、設備外表無(wú)毛刺、無(wú)銳利棱角，盡量減少水平表面面積，便于清潔和消毒。各種管道通過(guò)的孔洞必須密封。墻和頂棚的表面要光滑，不刺眼、不積塵、不受化學(xué)物和常用消毒劑的腐蝕，無(wú)滲水、不凝集蒸氣。地表面應該是一體、防滑、耐磨、耐腐、不反光、不積塵、不漏水，如能按污染區劃分給予顏色區別更好。工作臺面不能滲水，耐中等熱、有機溶劑、酸、堿和常用消毒劑的損害和腐蝕。實(shí)驗室必要的桌椅櫥柜等用具事先設計，便于穩妥安放和使用，彼此留有一定空間便于清潔衛生，表面消毒方便、耐腐。
消毒滅菌設施
必須安裝雙扉式高壓蒸汽滅菌器，安裝在半污染區與洗刷室之間。滅菌器的兩個(gè)門(mén)應互為連鎖，滅菌器應滿(mǎn)足生物安全二次滅菌要求。污染區、半污染區的房間或傳遞窗內可安裝紫外燈。室內應配制人工或自動(dòng)消毒器具（如消毒噴霧器、臭氧消毒器）并備有足夠的消毒劑。一切實(shí)驗室內的廢棄物都要分類(lèi)集中裝在可靠的容器內，都要在設施內進(jìn)行消毒處理（高壓、化學(xué)、焚化、其它處理），儀器的消毒選擇適當的方法，如傳遞式臭氧消毒柜、環(huán)氧乙烷消毒袋等，如果廢棄物需要傳至實(shí)驗室外，應該消毒后并裝入密封容器、包裝。
凈化空調
實(shí)驗室污染區和半污染區采用負壓?jiǎn)蜗蛄黠L(fēng)凈化空調系統。污染區和半污染區不允許安裝暖氣、分體空調，不可用電風(fēng)扇。溫度230C±20C、相對濕度40%—70%。室內噪聲不過(guò)60分貝。氣流方向始終保證由清潔區流向污染區，由低污染區流向高污染區?？照{系統應安裝壓力無(wú)關(guān)裝置，以保證系統壓力平衡，排風(fēng)應采用一用一備自動(dòng)切換系統。發(fā)生緊急情況時(shí)，應關(guān)閉送風(fēng)系統，維持排風(fēng)，保證實(shí)驗室內安全負壓。供氣需經(jīng)HEPA過(guò)濾。排出的氣體必須經(jīng)過(guò)至少兩級HEPA過(guò)濾排放，不允許在任何區域循環(huán)使用。
室內潔凈度高于萬(wàn)級。實(shí)驗室送風(fēng)口應在一側的棚頂，出風(fēng)口應在對面墻體的下部，盡量減少室內氣流死角。保持單向氣流，矢流方式較為合適。實(shí)驗室門(mén)口安裝可視裝置，能夠確切表明進(jìn)入實(shí)驗室的氣流方向。Ⅱ級生物安全柜每年檢測一次。2A型的排氣可進(jìn)入室內，2B2型安全柜和Ⅲ級安全柜的排風(fēng)要通過(guò)實(shí)驗室總排風(fēng)系統排出。如果Ⅲ級安全柜是帶有二次HEPA過(guò)濾、移動(dòng)式，氣流亦可在室內排氣，但排氣口應靠近室內排風(fēng)口。如有其它設備如液體消毒傳遞窗、藥物熏蒸消毒器等的抽氣系統，必須經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾，并根據需要更換。
水的凈化處理每個(gè)房間出口附近設置一個(gè)非手動(dòng)開(kāi)關(guān)的洗手池。污染區、半污染區和有可能被污染的供水管道應采取防止回流措施。如有下水，水池或地漏要設置消毒設施。下水下方必須設有水封，并始終充+盈消毒劑，水封的排氣應加HEPA過(guò)濾裝置?？赡芪廴镜南滤荒芘欧诺较狙b置內，消毒后再排至公共下水道。如沒(méi)有下水排放，或不外排的所有廢水均須收集并高壓處理。潔凈區域的下水可直接排入公共下水道。
污染物和廢棄物處理
對可能污染的物品和其它廢棄物要放在的防止污染擴散或可消毒的容器里，以便消毒或高壓滅菌處理。
實(shí)驗室監控系統
應對實(shí)驗室各種狀態(tài)及設施設置監控報警點(diǎn)，構成完善的實(shí)驗室安全報警系統。備用電源非雙路供電情況下，應配有備用電源，在停電時(shí)，至少能夠保證空調系統、警鈴、燈光、進(jìn)出控制和生物安全設備的工作。
照明
照明應適合室內的一切活動(dòng)，不反射、不刺眼，不影響視線(xiàn)。照明燈把燈具的部件裝在頂棚里，或采取減少積塵措施。
通訊
實(shí)驗室內外應有適合的通訊設施（、傳真、計算機等），進(jìn)行無(wú)紙化操作。驗收和年檢BSL-3設施和運行必須是指令性的。實(shí)驗室的驗收或年檢應參考ISO10648標準檢測方法進(jìn)行密封性測試，其檢測壓力不低于250Pa，半小時(shí)的小時(shí)泄漏率不過(guò)10%，以保證維護結構的可靠性。新建設施的功能必須檢測驗收，確認設計和運作參數合乎要求方能使用。運行后每年再進(jìn)行一次檢測確認。