相差顯微鏡使用中的幾個(gè)問(wèn)題

（1）相位倒轉 當n’<n或n’>n時(shí)得到象的明暗反差正好相反，稱(chēng)為相位倒轉。當相位差δ=0時(shí)是無(wú)法識別的，隨著(zhù)δ的增大反差變大，當δ繼續增大到某一值后會(huì )出現相位倒轉。用90%高吸光值（高反差）物鏡時(shí)，這個(gè)轉變值約為0.55λ，用70%標準吸光值的物鏡時(shí)約為0.33λ。較高吸光值的物鏡應該用于分辨較小的光程差。

（2）暈輪和漸暗效應 在相差顯微鏡成象過(guò)程中，某一結構由于相位的延遲而變暗時(shí)，并不是光的損失，而是光在象平面上重新分配的結果。因此在黑暗區域明顯消失的光會(huì )在較暗物體的周?chē)霈F一個(gè)明亮的暈輪。這是相差顯微鏡的缺點(diǎn)，它妨礙了精細結構的觀(guān)察，當環(huán)狀光闌很窄時(shí)暈輪現象更為嚴重。相差顯微鏡的另一個(gè)現象是漸暗效應，指相差觀(guān)察相位延遲相同的較大區域時(shí)，該區域邊緣會(huì )出現反差下降。

（3）樣品厚度的影響 當進(jìn)行相差觀(guān)察時(shí)，樣品的厚度應該為5μm或者更薄，當采用較厚的樣品時(shí)，樣品的上層是很清楚的，深層則會(huì )模糊不清并且會(huì )產(chǎn)生相位移干擾及光的散射干擾。

（4）蓋玻片和載玻片的影響 樣品一定要蓋上蓋上蓋玻片，否則環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的暗環(huán)很難重合。相差觀(guān)察對載玻片和蓋玻片的玻璃質(zhì)量也有較高的要求，當有劃痕，厚薄不均或凹凸不平時(shí)會(huì )產(chǎn)生亮環(huán)歪斜及相位干擾。另外玻片過(guò)厚或過(guò)薄時(shí)會(huì )使環(huán)狀光闌亮環(huán)變大或變小。